操作中還應(yīng)注意如下問題：1，熱處理后應(yīng)注意自然冷卻。2.熱處理時要防止切片干燥。3，應(yīng)根據(jù)不同的抗體選擇合適的抗原修復(fù)方法。4，同一批抗原的檢測所用溫度和時間確保一致。5，注意形態(tài)學(xué)結(jié)構(gòu)的改變(一般經(jīng)高溫修復(fù)后胞漿會明顯被破壞，對細(xì)胞核的影響較大，會出現(xiàn)核破裂與蘇木到淡染等現(xiàn)象;而經(jīng)酶水解的切片，其細(xì)胞漿破壞視消化時間長短而異，但核破壞較輕)。6，如果在常用的緩沖液中無法實(shí)現(xiàn)抗原修復(fù)，或經(jīng)修復(fù)后的抗原定位發(fā)生改變，可改用一些不常用的緩沖液，或加一些螯合劑，如EDTA等可改善某些抗原的修復(fù)。

　　用于免疫酶組織化學(xué)抗原修復(fù)的消化酶很多，所選酶的種類、使用的濃度、pH、消化時間及溫度等均要視組織固定的不同，所檢測抗原的性質(zhì)與組織類型的不同而異，應(yīng)通過預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索確定。使用酶消化的原則：胰蛋白酶和蛋白酶K一般用于細(xì)胞內(nèi)抗原，如Keratin,CEA與GFAP等。胃蛋白酶則主要用于細(xì)胞間質(zhì)抗原的檢測。如fibronectin,Laminin與各型膠原等。一般來說，消化時間和組織切片固定的長短呈正比。在用酶消化與熱修復(fù)后均不能獲得結(jié)果的前提下使用抗原修復(fù)與酶消化結(jié)合的方法，有時會取得較為滿意的結(jié)果。一般常用蛋白酶K和微波相結(jié)合，但應(yīng)注意，無論何種性質(zhì)的抗原檢測均可能會在核內(nèi)出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。因此必須要做對照。